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癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

發(fā)布時(shí)間: 2019-03-08

三維(3D)培養(yǎng)物、球狀體和類(lèi)器官作為癌癥生物學(xué)研究的模型越來(lái)越受歡迎。與傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)相比,這些3D模型提高了科學(xué)家研究治療效果的能力。這些3D培養(yǎng)物可能有幾百微米厚,如何對(duì)如此厚的樣本深處的細(xì)胞內(nèi)的生物標(biāo)記物成像,成為了一大難題。

癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

Douglas Richardson博士是一家全球公認(rèn)的生物成像中心的主任。他使用來(lái)自誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)的皮質(zhì)神經(jīng)器官作為成像和顯微研究樣本。這些類(lèi)球體直徑約為600微米,是細(xì)胞寬度(平均8微米)的75倍。圖像(右上圖)顯示了Sir-Hoechst?染色劑識(shí)別的這些皮層神經(jīng)器官,此過(guò)程使用Zeiss?LSM 880共焦顯微鏡上的25xLD-LCI油浸物鏡成像。

說(shuō)到真正的3D分析-目前可以橫向和軸向捕捉深層組織內(nèi)的清晰圖像。Invitrogen? ProLong?Glass抗淬滅封固劑可讓科學(xué)家以比任何其他商用硬質(zhì)封固劑更高的深度捕獲3D培養(yǎng)物的清晰圖像。


癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

ProLong Glass抗淬滅封固劑是一種即用型硬質(zhì)封片劑,在固化后具有1.52的玻璃匹配折射率。該產(chǎn)品可將油浸式顯微鏡鏡頭與3D培養(yǎng)物之間的折射率不匹配降至最低。

優(yōu)勢(shì)包括:

? 焦點(diǎn)深度提高逾3倍

? 高達(dá)75%的軸向分辨率

? 卓越的橫向分辨率

它還為有機(jī)熒光團(tuán)和熒光蛋白提供出色的信噪比和光漂白保護(hù)。這使其非常適合制作清晰,明亮,高品質(zhì)的3D圖像。

癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像


照亮癌癥研究


在評(píng)估細(xì)胞健康、遺傳毒性和抗癌藥物的效力時(shí),細(xì)胞增殖分析是重要的一環(huán)。但增殖很少單獨(dú)進(jìn)行分析;增殖分析通常與其他細(xì)胞功能檢測(cè)探針聯(lián)用以提供細(xì)胞狀態(tài)的更多信息。為了保留對(duì)這些細(xì)胞功能探針的檢測(cè),Invitrogen? ClickiT? Plus EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)不僅提供了更高的性能和更簡(jiǎn)便的工作流程,而且與更多的熒光探針兼容 - 包括GFP,RFP和藻膽蛋白-可以讓您進(jìn)行多重檢測(cè),提供細(xì)胞狀態(tài)更豐富的信息。

癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

具有諷刺意味的是,細(xì)胞死亡機(jī)制對(duì)于多細(xì)胞生物的存活至關(guān)重要。細(xì)胞凋亡或程序性細(xì)胞死亡通過(guò)消除不需要的細(xì)胞和組織,同時(shí)破壞病毒感染或DNA損傷的細(xì)胞來(lái)降低致病威脅,對(duì)于生物體的正常生長(zhǎng)和發(fā)育是必不可少的。

這種程序性細(xì)胞死亡功能的失活是癌癥發(fā)展的核心。Invitrogen? CellEvent? Caspase-3/7Green檢測(cè)試劑是一種新型熒光底物,可用于檢測(cè)活化的caspase-3和-7,從而使您可以更輕松地利用上述試劑研究癌癥的關(guān)鍵過(guò)程。該試劑與高內(nèi)涵成像兼容,可與其他探針聯(lián)用研究細(xì)胞凋亡和細(xì)胞生理,從而在其他關(guān)鍵細(xì)胞功能的背景下研究細(xì)胞死亡。

更豐富地鑒定增殖。在這張人類(lèi)惡性黑色素瘤的圖像中,您不僅可以區(qū)分增殖細(xì)胞(粉紅色細(xì)胞核)和非增殖細(xì)胞(藍(lán)色細(xì)胞核),還可識(shí)別正在開(kāi)始增殖的細(xì)胞(藍(lán)色細(xì)胞核含有一些粉紅色)和活躍分裂的細(xì)胞(藍(lán)綠色細(xì)胞核與橙色紡錘)。


癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像

將細(xì)胞凋亡復(fù)合成像以獲得完整圖像。首先用CellEvent Caspase-3/7 Green檢測(cè)試劑(綠色)染色依托泊苷誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的U2OS人骨肉瘤細(xì)胞以檢測(cè)細(xì)胞凋亡,然后用Invitrogen? MitoTracker?Deep Red FM染料(粉紅色)標(biāo)記線(xiàn)粒體。固定和透化后,用Invitrogen? Alexa Fluor? 546鬼筆環(huán)肽(橙色)標(biāo)記肌動(dòng)蛋白。


癌癥圖像——3D培養(yǎng)物、類(lèi)器官和球狀體深度成像



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